服务热线:0532-86462526 / 86462527 / 86465999
banner
您现在的位置:
首页
>
>
柱层析硅胶操作方法及注意事项

柱层析硅胶操作方法及注意事项

  • 分类:行业资讯
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2022-09-02
  • 访问量:0

【概要描述】利用吸附原理,即利用硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力的差异,对合剂中的成分进行分离的色谱法。

柱层析硅胶操作方法及注意事项

【概要描述】利用吸附原理,即利用硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力的差异,对合剂中的成分进行分离的色谱法。

  • 分类:行业资讯
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2022-09-02
  • 访问量:0
详情

一、柱层析硅胶原理

利用吸附原理,即利用硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力的差异,对合剂中的成分进行分离的色谱法。

二、柱层析硅胶操作方法及注意事项

1. 色谱柱装填

 操作要点:装柱前,应在柱底垫一层脱脂棉,防止吸附剂外泄。

有干包装和湿包装两种方法

(1)干装:将柱层析硅胶不中断地通过漏斗装入柱中,形成细流,缓慢加入管中。柱层析硅胶也可以用橡皮槌轻轻敲击,使硅胶填料连续均匀紧密。柱子装满后,打开活塞下端,然后倒入淋洗液进行洗脱,排出柱内空气,保持一定液位。

(2) 湿法填料:将开始使用的淋洗液装入色谱柱,打开下活塞,让淋洗液缓慢流出。然后将硅胶缓慢连续倒入柱中(或将硅胶悬浮液和适量洗脱液缓慢加入柱中),硅胶受重力驱动,洗脱液在柱内自由沉降, 在此期间,应不断将流出液淋洗液加回柱中,以保持一定的液位,直至加入硅胶且柱内的沉降不发生变化。然后在硅胶上面加一小块滤纸或一点脱脂棉。根据加入的样品量,将洗脱液的液位控制在一定的高度。

luwUN8ylQiGyQXOp6t_sbA.jpg

2. 上样

将待分离的样品溶解在少量用于装柱的洗脱液中,制成小体积、高浓度的样品溶液,加入色谱柱的柱层析硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装柱所用的洗脱液,将样品溶解在挥发性溶剂中,加入适量硅胶(不超过色谱柱中硅胶总量的1/10),充分混匀用它去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀地加入柱顶(始终保持淋洗液在一定水平),然后盖上一层硅胶。上样时注意沿柱内壁缓慢加入,始终保持柱层析硅胶上表面平整;上样量为硅胶的1/60~1/30。

3. 洗脱

洗脱液的选择可以通过薄层色谱法进行筛选。一般TLC显影时Rf值为0.2~0.3的溶剂体系为很好的洗脱体系,采用梯度洗脱进行洗脱。

首先打开色谱柱下端的活塞,使洗脱液的流速保持在 1~2 滴/秒。洗脱液在上端连续加入(可使用分液漏斗控制加入速度与下端流速相近)。如果单一溶剂的洗脱效果不好,可以用混合溶剂(一般不超过三种溶剂)洗涤,通常采用梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力由弱到强逐渐增加。

4、采集处理

以大约等于所用二氧化硅量的等分试样收集洗脱液。通过薄层对每个洗脱液进行定性检查,并将含有相同成分的洗脱液合并。往往可以通过浓缩和重结晶得到一定的单体组分。如果还是几种单体成分的混合物,单体成分的结晶就不容易析出。需要进一步色谱或通过其他方法进行分离。

关键词:

扫二维码用手机看

CONTACT INFORMATION

联系方式

山东省青岛莱西市姜山工业园

0532-86465788

FOLLOW US

微信号

扫一扫添加微信

erweima

ONLINE MESSAGE

在线留言

留言应用名称:
客户留言
描述:
验证码